酶联免疫吸附试验的原理和过程

    酶联免疫吸附试验的原理是，首先把酶分子与抗体或抗原相结合，这种结合不会改变抗体和抗原的免疫学特性，又保留了酶的活性。然后用酶标记的抗体或抗原，与吸附在固相载体上的已知抗原或抗体，发生特异性的结合。最后加入底物溶液，使其发生化学反应。

    酶联免疫吸附试验是一种酶联免疫技术。用于检测包被于固相板孔中的待测抗原(或抗体)。即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

    酶联免疫吸附试验是酶免疫测定技术中应用最广的技术。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。更多相关知识阅读参考：不检查就打hpv疫苗有问题吗？

    在寄生虫病方面，它用于对疟原虫、阿米巴、利日曼原虫、锥虫、血吸虫、囊虫、弓浆虫、肺吸虫、肝吸虫、血丝虫、旋毛虫病等血清学诊断，这对人医和兽医都很重要。在病原微生物方面已用于检查链球菌、沙门氏菌、布氏杆菌、结核杆菌、麻疯杆菌、霍乱弧菌、淋球菌、假丝酵母菌等的抗体，还可用于破伤风抗毒素和霍乱弧菌抗毒素的测定以及检测斑疹伤寒立克次氏体感染后的抗体，可作诊断。

    对立克次氏体还可用以鉴别密切有关的种属。也有用于检查鹦鹉热衣原体抗体的报导。试用于病毒抗体检查报告的有流感病毒、腮腺炎病毒、麻诊、风疹、轮状病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、EB 病毒、腺病毒、肠道病毒、脑炎病毒、黄热病毒、狂犬病毒和脊髓灰质炎病毒等，其敏感性都超过目前常用的检查方法。在免疫性疾病方面有试用作自身疫病抗体测定以及对过敏的诊断，例如检测各种过敏原的抗体、DNA 抗体及甲状腺球蛋白抗体，红斑性痕疮抗体等等。在卫生学方面，可用于检测食品中葡萄球菌肠毒素及沙门氏菌毒素等等。

    注意事项

    1. 底物：

    各种酶都有对底物的特异性，所以使用不同种类的酶要求有不同的底物。

    一旦酶结合物已经确定(如 AP或HRP) ，那么可供选择底物的范围是很有限的。在这有限底物的范围内如何选择合适的底物，应按下列几个条件进行选择： (1)底物在未被酶催化以前应该是无色的，而经酶催化后有明显的颜色变化，这样可使结果分辨清楚;(2)所显色泽易干洗脱;(3)显色后的产物要求稳定，在作定量测定时所产生的有色物质应该是可溶性的;(4)价廉，易得而且无毒。因此，对 AP酶结合物来讲，一般均用硝基苯磷酸盐，显色后呈桔黄色，色泽稳定，用2mol/LNaOH 终止反应，可用波长 403nm测定O.D值。

    2. 洗涤剂与稀释剂：

    为了使特异性结合的抗体量尽可能多，包被微量反应板凹孔的抗原应该稍微过量。但在孵育或洗涤过程中，已吸附的抗原可能有部份会从固相载体上被洗涤下来。从而使加入被检血清中的特异性抗体以外的蛋白质很可能会吸附到原来包被抗原凹孔的空白处，增加本底颜色,产生假阳性反应，这是限制 ELISA 特异性的一个因素，因此不少学者在稀释剂及洗涤剂中加入各种保护性阻剂来抑制非特异性蛋白的竞争性吸附作用。

    检查过程

    其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。

    根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA(微量板 ELISA);另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA,称为斑点ELISA(Dot-ELISA);再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA(C-ELISA)。在微量板ELISA中，又根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争 ELISA、阻断ELISA及抗体捕捉ELISA。想要了解更多详情点击：华泽优孕